elisa檢測試劑盒常見的10種測定問題與解答 
elisa檢測試劑盒對于科研實(shí)驗(yàn)人員來說，不僅需要嚴(yán)格進(jìn)行說明閱讀、依照elisa檢測試劑盒說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，還需要強(qiáng)大的耐心與分析能力，而相對于即將畢業(yè)的科研人員來說就更需要一份簡單明了的elisa檢測試劑盒說明書或者相關(guān)老手來輔助進(jìn)行檢測試劑盒的操作了，下面原鑫生物關(guān)于elisa試劑盒常見問題羅列10點(diǎn)，以便相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究新手方便易懂。
問題一 問：elisa檢測試劑盒如何進(jìn)行預(yù)測定，實(shí)驗(yàn)方案如何調(diào)整？ 答：為了保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，避免時(shí)間和材料的損失，正式試驗(yàn)前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)測定， 并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；根據(jù)預(yù)測定結(jié)果確認(rèn)是否需要調(diào)整樣本量、提取過程中料液比是否需要調(diào)整、過程中料液比是否 需要調(diào)整、標(biāo)準(zhǔn)線性是否滿足要求等。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果評價(jià)過程中的任何問題均可與專屬技術(shù)專員聯(lián)系。
問題二 問：elisa檢測試劑盒如何選擇合適的比色皿和微孔板？ 答：①通常采用玻璃或石英兩種材質(zhì)的比色皿：紫外分光光度法通常使用石英比色皿（口沿處有標(biāo)有 Q），可見分光光 度法通常使用玻璃比色皿（口沿處有標(biāo)有 G）。 ②按說明書要求使用1 mL 玻璃/石英比色皿皿（光徑=1 cm）、200 μL 微量玻璃/石英比色皿（光徑=1 cm）、普通/UV微孔板（光徑=0.5 cm）。
問題三
問：elisa檢測試劑盒離心轉(zhuǎn)速和離心力如何設(shè)置? 答：說明書中轉(zhuǎn)速有離心力（×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（rpm）兩種表示方式，具有自動(dòng)切換功能的可直接設(shè)定相應(yīng)轉(zhuǎn)速 （rpm 或×g），若需要手動(dòng)轉(zhuǎn)換可參照下列公式計(jì)算：g=r*11.18*10^-6*rpm^2*注釋：r為有效離心半徑（即離心機(jī)軸心到樣品中心位置的長度），單位厘米。
問題四
問:elisa檢測試劑盒分光光度法和酶標(biāo)儀法試劑盒能否通用？ 答：不可以通用，兩種試劑盒根據(jù)不同的檢測環(huán)境設(shè)計(jì)了相應(yīng)的反應(yīng)體系和試劑濃度，并按照標(biāo)準(zhǔn)流程進(jìn)行開發(fā)和， 每種試劑盒均有相應(yīng)的驗(yàn)證數(shù)據(jù)，若用戶自行混用，公司將無法提供相應(yīng)的技術(shù)支持。
問題五
問：elisa檢測試劑盒種試劑變色后還可以使用嗎？ 答：不可以，使用前需要注意觀察試劑顏色，若出現(xiàn)變色后則停止使用。
問題六
問：elisa檢測試劑盒按照說明書冷藏后出現(xiàn)沉淀的試劑還可以用嗎？ 答：可以，試劑盒中含有濃度較高或過飽和試劑，低溫會(huì)導(dǎo)致溶解度下降進(jìn)而出現(xiàn)沉淀，建議將試劑恢復(fù)至室溫，振蕩 溶解后使用，若無法解決請及時(shí)與技術(shù)專員聯(lián)系。
問題七
問：elisa檢測試劑盒可以改變說明書中加試劑順序嗎？ 答：不可以，否則可能造成反應(yīng)不能正常進(jìn)行而導(dǎo)致測定失敗。
問題八
問：elisa檢測試劑盒吸光度特別高怎么辦？ 答：檢測吸光值應(yīng)處于標(biāo)準(zhǔn)吸光值線性范圍內(nèi)或符合說明書注意事項(xiàng)中對最高吸光值的要求，若超出規(guī)定值應(yīng)將待測 樣品進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行檢測；也可聯(lián)系公司工作人員提供相應(yīng)的技術(shù)支持。 特別注意：紫外分光光度法應(yīng)使用石英比色皿，若吸光值異常高（吸光值≥3），則表明所使用的是玻璃比色皿或 普通酶標(biāo)板，需進(jìn)行更換，同時(shí)檢查比色皿潔凈度和使用規(guī)范。
問題九 問：elisa檢測試劑盒為什么?A 會(huì)接近于零？ 答：①排除試驗(yàn)異常情況且復(fù)測后?A 仍趨于零，表明反應(yīng)不能發(fā)生：如果是測定酶活性，表明樣品可能沒有酶活性； 如果是測定某種物質(zhì)，則表明該樣品可能不含有此種物質(zhì)。 ②體系中還發(fā)生了其它干擾反應(yīng)，該反應(yīng)的底物或者 產(chǎn)物在該波長下也有光吸收，并且變化方向相反，幾乎抵消了正常酶反應(yīng)，可以通過設(shè)置新的對照排除。 ③樣品 保存不當(dāng)造成預(yù)期指標(biāo)發(fā)生改變，需仔細(xì)檢查樣品處理、采集和保存以及提取狀況。
問題十
問：elisa檢測試劑盒為什么?A 會(huì)出現(xiàn)負(fù)值？ 答：①可逆反應(yīng)造成：可以通過適當(dāng)縮短反應(yīng)時(shí)間來防止逆反應(yīng)的發(fā)生； ②體系中發(fā)生其它干擾反應(yīng)：該反應(yīng)的底物 或者產(chǎn)物在該波長下也有光吸收，并且變化方向相反，超過了正常反應(yīng)，可以通過設(shè)置新的對照排除。 ③反應(yīng)體系 中存在不溶物或者氣泡：顆粒沉淀或者氣泡破裂后會(huì)導(dǎo)致吸光度顯著下降，出現(xiàn)負(fù)值，顆粒通常來源于樣品粗提 液，可以提供再次離心，確保得到澄清的上清液；氣泡可能在反應(yīng)體系中產(chǎn)生，可以通過降低反應(yīng)速度。
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